影片讲述了新生代蜘蛛侠迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）携手蜘蛛格温（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音），穿越多元宇宙踏上更宏大的冒险征程的故事。面临每个蜘蛛侠都会失去至亲的宿命，迈尔斯誓言打破命运魔咒，找到属于自己的英雄之路。而这个决定和蜘蛛侠2099（奥斯卡·伊萨克 Oscar Is aac 配音）所领军的蜘蛛联盟产生了极大冲突，一场以一敌百的蜘蛛侠大内战即将拉响！
王宗尧,李昕岳,杜奕衡,雨侨,魏玉海,石咏莉,谷尚蔚,裴殷
野岛健儿,远藤绫,柚木凉香,杉山纪彰,川澄绫子
朴施妍,崔显旭,李元郑,金镀我,许元西,朴智永,具慈健,金建,姜律
梁靖康,郭晓婷,菅纫姿,余皑磊,高鑫,巨兴茂,李春嫒,贾宏伟,王大奇,洪浚嘉,侯煜,晗青,刘哲尔,龍昇,高戈,刘泳希,谢静,李梦男,任帅,董彦麟,宋禹,田征,周浩东,赖晓生,胡文喆,杜姚,陈昊明,泰煜恩,袁布,涓子,孙斌,赵滨,沈保平,张春仲,巩金国,朱轩霆 ,黄家婧 ,可岚,黄耀鸿
伯尼·麦克,阿什顿·库彻,佐伊·索尔达娜,Judith Scott,Hal Williams
伊万·麦克格雷格,海登·克里斯滕森,摩西·英格拉姆,乔尔·埃哲顿,邦妮·皮耶斯,库梅尔·南贾尼,因迪拉·瓦玛,鲁伯特·弗兰德,小奥谢拉·杰克逊,姜成镐,西蒙娜·凯塞尔,本·萨弗迪,玛雅·厄斯金,Marisé Álvarez,Stephen Cannon,Paul O'Kelly
